세포 배양 에서의 트랜스퍼린: 혈청 없는 시스템 에 있어서 중요한 철기 운반체

I. 트랜스퍼린 (TF) 의 구조

TF는 약 79 kDa의 분자 질량과 약 6의 소전자 지점으로 679 개의 아미노산 잔해를 포함합니다.6그 아미노산 염기서열에는 단백질 구조의 안정화에 중요한 19쌍의 디솔피드 결합을 형성할 수 있는 38개의 시스테인 잔류가 포함되어 있습니다.그리고 3개의 N-글리코실레이션 위치를 가지고 있습니다.TF는 구조적으로 비슷한 두 개의 철 결합 도메인으로 구성됩니다: N-terminal 도메인 (336 aa) 및 C-terminal 구형 도메인 (343 aa). 두 도메인은 짧은 간격 염기서열에 의해 연결되어 있습니다.

도메인 내의 각 Fe3+ 결합 부위는 두 개의 티로신, 한 개의 아스파르틱산, 한 개의 히스티딘을 포함한 4 개의 보존 아미노산을 포함하고 있으며, 이러한 잔류물은 여덟면 기하학으로 배열되어 있습니다.또한, 철 원자를 안정시키기 위해 Fe3+ 결합 부위에서 탄산 이온으로 제공되는 두 개의 산소 원자가 필요합니다. TF 결합 부위 근처, Gly-65, Glu-83, Tyr-85, Arg-124, Lys-206,세르-248 및 리스-296은 철의 방출에 중요한 역할을 합니다.N-terminus에 반대되는 영역에 위치한 Lys‐206‐Lys‐296 염기 쌍의 프로토네이션 효과는 TF의 열린 또는 닫힌 형태를 유도할 수 있다.

II. 트랜스퍼린 (TF) 의 기능

철은 세포 성장, 증식 및 대사 활동을 유지하는 데 필수적인 요소 중 하나입니다. 신체 내의 대부분의 자유 철은 트랜스퍼린에 의해 운반되고 전달됩니다.혈중의 주요 철 결합 및 철 운송 β-글로불린, 주로 위장관에서 흡수 된 철과 적혈구 분해에서 분비 된 철을 운반하는 데 책임이 있습니다. 인간 혈청에서 TF의 농도는 약 2.5 g/ L입니다.그 중 30%는 철분으로 이루어져 있다TF는 주로 3가지 형태로 존재합니다. 홀로-트랜스퍼린 (holo-TF), 부분 포화 트랜스퍼린 (sidero-TF), 아포-트랜스퍼린 (apo-TF).

세포외 부위 (pH ≈ 7.5) 에서, 트랜스퍼린 수용체 (TFR) 는 철-결합 TF (holo-TF) 에 대한 결합 친밀도가 철-무형 형태 (apo-TF) 에 비해 높습니다.철로 결합된 TF는 그 후 내부화됩니다., apo-TF는 세포 표면에 분비됩니다. 내수체 (pH ≈ 5.6) 에서 TFR는 holo-TF보다 apo-TF에 우선적으로 결합합니다.apo-TF의 내장체에서 혈관막으로의 운반을 중재합니다.이 과정을 통해 철분이 세포로 전달되고 TF는 재활용됩니다.

철은 생체 세포 배양에 매우 중요합니다. 다양한 효소의 코팩터로서, 트랜스퍼린은 여러 세포 생리적 기능에 참여합니다. 그 중 세 가지 주요 측면은 아래와 같이 설명됩니다.

1세포 호흡 대사에 참여
미토콘드리아는 세포 산화 대사 및 세포의 에너지 센터의 위치입니다. 미토콘드리아막에 있는 수키나트 탈수화제는 이 과정에 중요한 역할을 합니다.수키나트 디히드로겐아스의 성분으로, 철은 세포 산화 대사 및 에너지 생산에 관여합니다.

2- 산화 손상으로부터 세포를 보호하는
철·포피린 구조의 핵심으로서 철은 카탈라제와 페록시다제와 같은 효소의 주요 구성 요소입니다.H2O2를 포함한 과산화물 (peroxides) 에 의한 손상으로부터 세포를 보호하는세포에 항산화 방어 기능을 제공하고 세포 건강을 향상시킵니다.

3세포 밀도와 생존성 향상
철은 세포의 증식을 위한 필수 요소입니다. 철 없이는 세포는 증식 중에 G1 단계에서 S 단계로 진행할 수 없습니다.그리고 철 부족은 세포의 폐사 및 사망을 유발합니다.철 부족은 세포 복제 과정에서 DNA 합성을 저해합니다.왜냐하면 철은 리보뉴클레오티드 리덕타즈의 구성 요소이기 때문에 DNA 합성에서 리보뉴클레오티드를 디옥시리보뉴클레오티드로 변환하는 속도를 제한하는 효소.

III. 혈청 없는 배양에서 트랜스퍼린의 응용

트랜스퍼린 (TF) 은 세포 배양에서 필수적인 성분입니다. 특히 혈청 자유 매체 (SFM) 에서 TF는 생물 제조에서 광범위하게 적용되었습니다.모노클론 항체 생산과 같은, 재조합 단백질 합성, 그리고 면역 세포와 줄기 세포의 배양.

1세포 성장 및 제품 생산성 향상
혈청 없는 매체 (SFM) 에 TF를 보충하면 CHO 세포의 고밀도 배양을 지원하고 생산 주기를 연장하고 단백질 생산량을 증가시킵니다.
하이브리도마 세포를 위해 혈청 없는 매체에 TF를 첨가하면 세포 증식율과 생존성이 향상됩니다.
철분 동화 상태를 조절함으로써, 트랜스퍼린은 단백질 글리코폼의 이질성을 감소시키고 의약품의 대량 일관성을 보장합니다.
CAR-T 세포, NK 세포 및 메젠히마 줄기 세포 (MSC) 의 혈청 없는 배양에 적용되면 TF는 세포의 생존성과 기능적 특성을 유지합니다.

2.포뮬레이션 단순화 및 표준화
ITS (인슐린-트랜스퍼린-셀레늄) 와 SPIT/SPITE를 포함한 보충제의 핵심 성분으로서, TF는 동물이 없는화학적으로 정의 된 수립물질 및 롯데에서 롯데로 변동을 줄이십시오..

3화학 켈레이터의 대체
화학 켈레이터 (예: EDTA, 시트라트) 는 적산주기를 조절하기 어렵고 자유 라디칼을 생성하는 경향이 있습니다.TF에 의한 철 결합의 장점은 자유 라디칼 부산물을 생성하지 않고 자연적 인 수용체 매개 경로에 의존한다는 것입니다..

베이징 안레이트 바이오테크놀로지 Co., Ltd.는 효모와 CHO 세포에서 파생된 산업적으로 생산된 동물 없는 재조합 인간 트랜스퍼린을 제공합니다. 문의와 시험 테스트는 환영합니다.

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